細(xì)胞凋亡檢測
服務(wù)簡介：
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)：多細(xì)胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞主動性死亡過程。多細(xì)胞生物體內(nèi)，某些細(xì)胞的死亡是個體發(fā)育中一個預(yù)定的，并受到嚴(yán)格程序控制的正常組成部分。不同于一般的細(xì)胞壞死(cell necrosis)。細(xì)胞凋亡是指由基因控制的細(xì)胞自主有序死亡的主動過程，涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。針對凋亡時期不同，檢測的方法有所不同。
提供的細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)服務(wù)包括有Annexin V/PI雙染檢測細(xì)胞早期凋亡和TUNEL法檢測細(xì)胞晚期凋亡， 可用于檢測不同類型、不同處理方式、不同時期細(xì)胞凋亡狀況及分析凋亡細(xì)胞比例。
一、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡——Annexin V/PI 雙染色法
原理：在細(xì)胞凋亡早期位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（PS)遷移至細(xì)胞膜外測。磷脂結(jié)合蛋白V（Annexin V）是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，它于PS具有高度的結(jié)合力。因此，Annexin V可以作為探針檢測暴露在細(xì)胞外測的磷脂酰絲氨酸。故利用對PS有高度親和力的Annexin V，將Annexin V標(biāo)記上熒光素（如異硫氰酸熒光素FITC），用流式細(xì) 胞儀即可檢測凋亡細(xì)胞。細(xì)胞發(fā)生凋亡時，膜上的PS外露早于DNA斷裂發(fā)生，因此Annexin V染色法檢測早期細(xì)胞凋亡較TUNEL法更為靈敏；Annexin V染色法不需固定細(xì)胞，可避免PI染色因固定造成的細(xì)胞碎片過多及TUNEL法因固定出現(xiàn)的DNA片段丟失。因此，Annexin V法更加省時，簡單，結(jié)果更為可靠，是目前zui為理想的檢測細(xì)胞凋亡的方法。
二、TUNEL
原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細(xì)胞在凋亡早期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是熒光素（fluorescein）標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端，并與連接辣根過氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的熒光素抗體特異性結(jié)合，后者又與HRP底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）反應(yīng)產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng)（呈深棕色），特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞，因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂，因而沒有3‘-OH形成，很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測。還可應(yīng)用于抗腫瘤藥的藥效評價，以及通過雙色法確定細(xì)胞死亡類型和分化階段。
服務(wù)流程：
Annexin V/PI雙染檢測調(diào)亡（適用于細(xì)胞早期凋亡檢測）
1.細(xì)胞培養(yǎng)及接種
2.誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
3.細(xì)胞收集、計數(shù)
4.Annexin V/PI標(biāo)記
5.流式細(xì)胞儀檢測
6.結(jié)果分析
TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡（適用于細(xì)胞晚期凋亡檢測）
1.標(biāo)本預(yù)處理
2.內(nèi)源性過氧化物酶滅活
3.TdT酶反應(yīng)
4.生物素標(biāo)記
5.染色
6.封片觀察
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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