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RNA pull down技術(shù)
RNA pull down用體外轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記生物素RNA探針,然后與胞漿蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠結(jié)合,從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后,通過(guò)Western Blot檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白是否與RNA相互作用,質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白鑒定蛋白質(zhì)類(lèi)型。
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凝膠遷移實(shí)驗(yàn)EMSA/EMSA
蛋白質(zhì)可以與末端標(biāo)記的核酸探針結(jié)合,在瓊脂糖膠或非變性膠中電泳時(shí)這種復(fù)合物比無(wú)蛋白結(jié)合的探針在凝膠中泳動(dòng)的速度慢,即表現(xiàn)為相對(duì)滯后。該方法可用于檢測(cè)DNA結(jié)合蛋白、RNA結(jié)合蛋白,并可通過(guò)加入特異性的抗體(supershift)來(lái)檢測(cè)特定的蛋白質(zhì),進(jìn)行未知蛋白的鑒定。
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RIP技術(shù)(RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀)
RIP技術(shù)(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀),是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)。分析與目的蛋白結(jié)合的RNA.運(yùn)用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái),然后經(jīng)過(guò)分離純化就可以對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行分析
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染色質(zhì)免疫共沉淀(chip)/Chip assay/chip-seq
染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)主要應(yīng)用于驗(yàn)證及探尋體內(nèi)環(huán)境中,蛋白質(zhì)和DNA的直接相互作用,旨在探索特定蛋白質(zhì)在DNA上的特定結(jié)合序列,常在研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及組蛋白修飾中被應(yīng)用到。
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免疫共沉淀(CO-IP)/CO-IP/免疫共沉淀
以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x,那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來(lái)。
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免疫沉淀(IP)/IP/免疫沉淀
在細(xì)胞生物學(xué)研究中,有些靶蛋白表達(dá)水平不高,難以用免疫印跡的方法檢測(cè)到。為此可用特異性識(shí)別靶蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀,純化和富集靶抗原。