熒光定量PCR就是測定樣品中某個模板的起始量ct值。但在實際操作過程中,由于之前DNA提等步驟,各個步驟存在不同的效率,在實驗過程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響,每個樣本的Ct值并無法真實反映每個樣品中初始模版的絕對量,這就使得我們無法對不同處理的樣本進(jìn)行分析評價。因此,我們需要一個參考標(biāo)準(zhǔn)對每一個樣本進(jìn)行校正,排除其他無關(guān)因素帶來的的影響。
普通PCR儀與熒光定量PCR有什么差異?
普通的PCR儀比熒光定量PCR儀少了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng),普通的PCR儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段,而實時熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的,定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作,反之就可以了,況且這樣代價太大了,一般的實驗室都不允許這樣做的??傊畠烧叩墓δ懿荒芑ハ嗳〈?。濕度傳感器探頭,不銹鋼電熱管PT100傳感器,鑄鋁加熱器,加熱圈流體電磁閥。
普通的基因擴(kuò)增儀只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。但是價格要低很多,而且運行成本也要低很多。不過不能直接得到擴(kuò)增結(jié)果,還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病,品種分子標(biāo)記篩選,甚至親自鑒定等都可以由普通PCR儀完成。
但是,某些需要定量的實驗就必須用到實時定量PCR了。比如檢測某些病原物的數(shù)量(血液乙肝病毒復(fù)制程度),特定基因的表達(dá)量(比如結(jié)合反轉(zhuǎn)錄做的RNA定量分析),某些基因在染色體組中拷貝數(shù)等等。熒光定量PRC一般不需要對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析,操作相對簡單些,但是耗材實在是貴。
簡單來說,看有沒有用普通PCR儀,看有多少用熒光定量PCR?;驍U(kuò)增儀只能擴(kuò)增,不能檢測,便宜。熒光定量PCR儀除了擴(kuò)增,還能在擴(kuò)增的同時檢測DNA發(fā)出的熒光信號,試劑和儀器都更貴。