MTT檢測細(xì)胞增殖凋亡是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞;同時,多細(xì)胞生物可以由一個受精卵,經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化,zui終發(fā)育成一個新的多細(xì)胞個體。必須強(qiáng)調(diào)指出,通過細(xì)胞分裂,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個子細(xì)胞中去。可見,細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。
MTT檢測細(xì)胞增殖凋亡,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。MTT檢測細(xì)胞增殖凋亡實際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,對完整的單個凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色,能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)測定,并可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞,因而在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用.
MTT檢測細(xì)胞增殖凋亡又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。