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熒光定量PCR是生命科學領域的一項重要技術
更新時間:2015-07-27 點擊次數:1296次
  熒光定量PCR技術,是通過在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化實時監(jiān)測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化,對起始模板進行定量分析的方法。實驗采用兩種定量方式,即定量和相對定量。熒光定量PCR可用于mRNA表達量水平檢測、MicroRNA表達量水平檢測和基因拷貝數檢測。實驗的方法可分為SYBRGreenI法和TaqMan探針法。
  
  熒光定量PCR就是在PCR擴增過程中,通過熒光信號,對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系,所以成為定量的依據。由于熒光定量PCR的眾多優(yōu)點,現在已經是生命科學領域的一項重要技術,并成為基因表達差異和文章發(fā)表*的部分。熒光定量PCR輸出的數據不同于常規(guī)PCR電泳檢測,很多沒有做過熒光定量PCR的研究者常常感到高深莫測,不知從何入手;甚至一些做過一些實驗的研究者也會對數據處理分析感到迷惑。很多時候,盡管知曉qPCR的原理和基本操作,仍然浪費時間和精力,而得不到好的結果或對大量的數據不知所措。
  
  服務要求
  
  需提供新鮮或保存完好的細胞(至少5×106)、組織(至少50mg)、血液(300μl)等樣本材料;或純化好的總RNA(OD260/OD280在1.9-2.1之間,完整性好)或總DNA(OD260/OD280在1.7-1.9之間,完整性好);或反轉錄好的cDNA不少于30μl(反轉錄的總RNA完整性好,純度在1.9-2.1之間);同時提供待測基因序列或登錄號。
  
  報告內容
  
  總RNA(或DNA)濃度,電泳圖片,擴增曲線,熔解曲線,Ct值以及數據統計分析(可選),實驗報告以及剩余引物和模板(信諾金達可保存1個月)