細胞系是來自多細胞生物體的細胞群體，其通常不會無限增殖，但是由于突變，逃避了正常細胞的衰老，從而可以持續(xù)分裂的一種細胞的集合。
 

　　因此，細胞可以在體外長時間生長。細胞系是研究多細胞生物體的生物化學(xué)和細胞生物學(xué)的非常重要的工具，例如信號通路、腫瘤殺傷、細胞增殖、細胞周期、突變分析、基因表達、蛋白表達、細胞分化等等。此外，永生化的細胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用，比如建立新來源、新突變的細胞系。
 

　　培養(yǎng)步驟：
 

　　1)復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中)，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
 

　　2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 

　　1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
 

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
 

　　2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
 

　　3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 

　　4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
 

　　PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代(方法同上)。
 

　　2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
 

　　方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 

　　方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 

　　3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。