細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身藥物化學(xué)過程的改變,細胞膜上出現(xiàn)Pgp糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受,隨著藥物濃度的遞增,其耐受程度逐漸加強。
耐藥細胞株基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內(nèi),核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動
耐藥細胞株操作流程:
1、載體構(gòu)建:將外源基因構(gòu)建到合適的載體上,如需病毒轉(zhuǎn)染,則包裝病毒。
2、篩選濃度測定:以14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種:轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和 細胞形狀而定。
4、細胞轉(zhuǎn)染:用構(gòu)建好的載體(或包裝好的病毒)轉(zhuǎn)染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結(jié)果。